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生物素标记抗体

2015/11/18 华泰昕生物|HyperCyte 已读

1. 用无水 DMSO 配制 10mg/ml 生物素 N- 羟基琥珀酰亚胺酯溶液。

2. 用硼酸盐缓冲液( 0.1mol/L, pH8.8 )配制浓度至少为 1 ~ 3mg/ml 的抗体溶液,若抗体储存时加入了叠氮钠,则标记前须先在硼酸盐缓冲液中充分透析以除去叠氮钠。

3. 按 25 ~ 100 μ g/mg 的比率将生物素酯加入抗体中,混合均匀并在室温下孵育 4h 。在完成结合反应之前 DMSO 的终浓度不能低于 5 %,否则生物素酯会出现沉淀。高浓度的生物素酯会导致多个生物素分子结合在抗体上,因此可能会使所有抗体都被标记。较低的比率则会是使生物素化保持在最低限度( 25 μ g 生物素酯 /mg 抗体的最初摩尔比为 10 : 1 )。

4. 每 250 μ g 生物素酯内加入 20 μ l 1mol/L 的氯化铵,室温孵育 10min 。

5. 将抗体溶液用 PBS 或其他所需的缓冲液透析,以除去未结合的生物素。由于生物素分子较大,故透析比预料中的要慢,或者用蛋白 A 或蛋白 G 层析柱再次纯化抗体。

6. 按纯化抗体的储存方法保存标记抗体。