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核酸适配体 Aptamer

2015/11/18 华泰昕生物|HyperCyte 已读

适配体是指利用指数富集的配体进化技术(SELEX)从特定的寡核苷酸库中筛选出能与靶分子特异性结合寡核苷酸(DNA或RNA)。适配体在分析化学,在蛋白质组研究、临床医学、药物研发及基因调控等领域已经成为重要的研究工具。核酸适配体(Aptamer)是一类新型的识别分子。与单克隆抗体相比,其分子量较低(15-50碱基),没有免疫源性和毒性,可通过化学合成制备、结构改造以及标记,化学稳定性好,能可逆的变性与复性,可在常温下保存和运输。这些优点使适体有望取代和超过抗体,在生命分析中起重要的作用 。

适配体的类型有反义核苷酸链和随机核苷酸链。

反义核苷酸链通常包含15-20个核苷酸,其碱基组成与它们的靶序列是互补的。但是在实际应用中, 存在反义寡核苷酸容易被核酸酶降解、对特定靶位点的识别不够好、有一定毒性等问题,所以要对适配体中的核苷酸进行了各种各样的化学修饰。修饰位点一般在碱基、磷酸骨架等。

随机核苷酸链则是在反义核苷酸链的作用基础上发展来的。随机核苷酸链作用的靶序列除了核酸外还可以是蛋白质、有机小分子等。随机核苷酸链一般比反义核苷酸链要长,而且它们折叠形成的空间结构也往往发挥作用。

适配体具有与抗体相似的性质,并且有优于抗体的特点:

(1)特异性更强,对目标靶分子具有与抗体相当甚至更高的亲和性

(2)适配体较抗体更容易获得,可以大量快速的在体外合成,制备方法更为简单;

(3)可以针对不同种类的目标靶进行筛选,拓宽了其应用范围;

(4)稳定性优于抗体,利于储存。

SELEX技术介绍:

SELEX是指数富集配体系统进化的简称.它的基本原理就是就是利用分子生物学技术,构建人工合成的单链随机寡核苷酸文库,其随机序列长度在20~100个碱基左右.将随机寡核苷酸文库与靶分子相互作用,保留结合的寡核苷酸配基(aptamer) ,经反复扩增、筛选数个循环,即可使与该靶分子特异结合的寡核苷酸序列得到富集。 •其筛选流程包含和达尔文进化理论一样的三个过程分别是自发突变 ﹑自然选择和大量增殖.