大肠杆菌 O157:H7 荧光微球免疫层析试纸条的研制

2014/10/25 admin 78

【作者】 解泉源1; 赖卫华1; *; 刘春梅2; 孙吉昌3; 邓省亮4; 刘成伟3; 魏 华1; 游兴勇3; 熊勇华1;

【机构】 1.南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室,江西 南昌 330047; 2.无锡中德伯尔生物技术有限公司,江苏 无锡 214000; 3.江西省疾控中心,江西 南昌 330029; 4.江西省科学院微生物研究所,江西 南昌330029;
 

【摘要】 目的:建立快速、灵敏检测大肠杆菌 O157:H7 荧光微球免疫层析试纸条法。方法:用羧基化荧光微球作为标记物,共价偶联抗大肠杆菌 O157:H7 鼠源单克隆抗体,将大肠杆菌 O157:H7 兔多抗和驴抗鼠抗体喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,以双抗体夹心反应模式制备了大肠杆菌 O157:H7 荧光微球免疫层析试纸条。结果:通过优化实验确定偶联缓冲液为 0.02M pH5.0 PB,抗体偶联微球量为 100μg/mg,试纸条可在加样 5min 后判读结果。制备的荧光微球试纸条对纯培养大肠杆菌 O157:H7 进行检测,肉眼观察检测限在 1.2×104CFU/mL,借助荧光读取仪检测限能提高到 6.1×103CFU/mL。试纸条除与金黄色葡萄球菌有微弱交叉反应外,与实验室保存的 30 株细菌无交叉反应。结论:大肠杆菌 O157:H7 荧光微球试纸条具有操作简便、快速灵敏、易于量化的特点,为该菌的检测提供了一种新型的手段。

 

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